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RNase R
來源: | 作者:geneseed | 發布時間: 2018-03-29 | 22706 次瀏覽 | 分享到:



產品簡介

RNase R (Ribonuclease R)是一種來源于大腸桿菌RNR超家族的3’-5’核糖核酸外切酶,可從3’-5’方向將RNA逐步切割成二核苷酸和三核苷酸。RNase R可消化幾乎所有的線性RNA分子,但不易消化環形RNA、套索結構或3’突出末端少于7個核苷酸的雙鏈RNA分子。RNase R常用于基因表達和可變剪切研究,可消化線性RNA以使環形RNA (circRNAs)或套索結構RNA (lariat RNA)得到富集。


    


產品規格
貨號
試劑
規格
保存條件
R0301
RNase R(20U/μL)
500 U
-20℃
10X Reaction Buffer
1 mL



產品
組分

Storage Buffer

50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0.1% Triton? X-100, 50% Glycerol

10X Reaction Buffer

200 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 M KCl, 1 mM MgCl2



單位
定義
        標準反應體系下,于 37℃,10 min 1 μg poly(A)轉化成酸溶核苷酸所需的酶量定義為一個活力單位(U)。


反應體系

        20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 100 mM KCl, 0.1 mM MgCl2, 37℃孵育。

        注:1RNase R 0.1-0.5 mM Mg2+存在時活性最高,反應中 EDTA 可能降低 RNase R 活性,此時可額外添加 MgCl2 使 Mg2+ 濃度最高達到 0.5 mM。2孵育后可于 70℃,10 min 使酶失活,再進行下游實驗如逆轉錄;也可不滅活,直接純化后進行下游實驗。


質量控制

        SDS-PAGE 檢測純度>99%;Total RNA  RNase R 消化后進行 RT-qPCR 檢測,線性 RNA 豐度明顯降低, 環形RNA 豐度基本不變。


性能比較-RNA電泳檢



    
        將10U RNase R加入到2.5 μg total RNA中,于37℃孵育30 min,之后直接進行電泳檢測,結果顯示RNase R+組28/18/5S條帶變淡(不可見),表明RNase R對total RNA的消化作用。吉賽和公司e或公司a的RNase R對total RNA消化效果相當。


性能比較
-
RT-qPCR檢測




        將10U RNase R加入2.5 μg total RNA,37孵育30 min,之后進行RT-qPCR實驗,結果顯示RNase R+β-actinFGFR2豐度都明顯降低,表明RNase R消化線性RNA。吉賽和公司eRNase R線性RNA消化效果相當,優于公司aRNase R。




        將
10U RNase R加入2.5 μg total RNA,37孵育30 min,之后進行RT-qPCR實驗,結果顯示RNase R+ 組中hsa_circFOXO3_002hsa_circMTO1_001豐度基本不變,表明環形RNA耐受RNase R消化。吉賽和公司e或公司aRNase R效果相當。

注:數據計算以RNase R+吉賽”組為對照,設定其相對豐度值為1。



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